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红细胞检测原理【血细胞分析仪】

来源:山东国康 作者:山东国康

红细胞检测原理

  50年代初期,美国库尔特先生研制了电阻抗法血细胞分析仪,开创了血细胞分析的新纪元。随着基础医学的发展,高科学技术的应用,特别是计算机技术的引用,血细胞分析仪的测量水平不断提高,测量参数不断增加,不但提高了医学检验的水平,还为临床提供更多有用的实验指标,对于某些疾病的诊断与治疗具有重要的临床价值。
 
  根据各项参数的血液分析检测原理不同,血细胞分析仪对红细胞的检测大致分为三个部分。
 
  1.红细胞数(RBC)和红细胞比积(Hct):迄今,绝大多数血液分析仪使用电阻抗法进行红细胞计数和红细胞比积测定,其原理同白细胞检测一样。红细胞通过小孔时,形成相应大小的脉冲,脉冲的多少即红细胞的数目,脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加,经换算即可得红细胞的比积。有的仪器先以单个细胞高度计算红细胞平均体积(MCV)。再乘以红细胞数得出红细胞比积。仪器根据所测单个细胞体积及相同体积细胞占总体的比例,可打印出红细胞体积分布直方图。稀释的血液进入红细胞检测通道时,其中含有白细胞,红细胞检测的各项参数均含有白细胞因素。由于正常血液有形成分中白细胞比例很少(红细胞:白细胞约为750:1),故白细胞因素可忽略不计。在某些病理情况下,如白血病,白细胞数明显增加而又伴严重贫血时,均可使所得各项参数产生明显误差。
 
  2.血红蛋白(Hb)含量测定:任何类型、档次的血细胞分析仪,血红蛋白测定原理都是相同的。被稀释的血液加入溶血剂后,红细胞溶解,释放血红蛋白,后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物.进入血红蛋白测试系统,在特定波长(一般在530一550nm)下比色,吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比,仪器便可显示其浓度。不同系列血细胞分析仪配套溶血剂配方不同,形成的血红蛋白衍生物亦不同,吸收光谱各异,但最大吸收均接近540nm。这是因为国际血液标准委员会(ICSH)推荐的氰化高铁(HiCN)法,HiCN最大吸收在540nm。校正仪器必须以HiCN值为标准。大多数系列血细胞分析仪溶血剂内均含有氰化钾,与血红蛋白作用后形成氰化血红蛋白(注意不是氰化高铁血红蛋白),其特点是显色稳定,最大吸收接近540nm,但吸收光谱与HiCN有明显不同。此点在仪器校正时应十分注意。
 
  为了减少溶血剂的毒性,避免含氰血红蛋白衍生物检测后的污物处理,近年来有些血细胞分析仪使用非氰化溶血剂。实验证明,形成的衍生物与HiCN吸收光谱相似,实验结果的精确性、准确性达到含有氰化物溶血剂同样水平。既保证了实验质量,又避免了试剂时分析人员的毒性和环境污染。
 
  3.各项红细胞指数检测原理:同手工法一样,红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白的含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW)。均根据仪器检测的红细胞数、红细胞比积和血红蛋白含量实验数据,经仪器内存程序换算出来的。
 
  RDW由血细胞分析仪测量获得是反映周围血红细胞体积异质性的参数。当红细胞通过小孔的一瞬间,计数电路得到一个相应大小的脉冲,不同大小的咏冲信号分别贮存在仪器内装计算机的不同通道,计算出相应的体积及细胞数.统计处理而得RDW。由于RDW来自十几秒内近万个红细胞的检测数据,不但可以克服测量红细胞直径时人为制片条件和主观因素的影响,还比P-J曲线更能直接、客观、及时地反映红细胞大小不等的程度,对贫血的诊断有重要意义。

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