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血细胞分析仪对白细胞分析的原理

来源:山东国康 作者:山东国康

血细胞分析仪对白细胞分析的原理

  血细胞分析仪检测法是临床诊断工作中最常用的实验方法之一。50年代以前,医学检验主要使用手工显微镜计数的方法进行红、白细胞计数及分类计数。由于操作过程的随机误差,实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差,手工法细胞计数不但费时费力,实验结果的精确性、准确性也受影响。
 
  40年代后期,库尔特发明并申请了粒子计数技术的设计专利。50年代初应用于血细胞计数,其原理是根据血细胞非传导的性质,以电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行血细胞计数和体积测定,这种方法称为电阻抗法,也被称为库尔特原理。
 
  把用等渗电解质溶液稀释的细胞悬液倒入一个不导电的容器中,将小孔管插到细胞悬液中。小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分,其内侧充满了稀释液,并有一个内电极,外侧细胞悬液中有一个外电极。检测期间,当电流接通后,位于小孔两侧的电饭产生稳定的电流。稀释液通过小孔管璧上固有的小孔向小孔内部流动。因为小孔周围充满了具有导电性的液体,其电子脉冲是稳定的。如果供给的电流I和阻抗R是稳定的。根据欧姆定律,通过小孔的电压E也是不变的(这时E=TR)。当一个细胞通过小孔时,由于细胞的导电性质比稀释液要低,在电路中小孔感应区内电阻增加,于瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号,称为通过脉冲。电压增加和变化的程度取决于非传导性细胞占据小孔感应区的体积,即细胞体积越大,引起的脉冲越大,产生的脉冲振幅越高。脉冲信号经过下列步骤,得出细胞计效结果。
 
  1.放大:由于血细胞通过微孔时产生的脉冲讯号非常徽弱,不能直接触发计数电路,因此必须通过电子放大器,将微伏讯号放大为伏级脉冲讯号。
 
  2.阈值调节:在一定范围内调节参考电平的大小,使计数结果尽可能符合实际。
 
  3.甄别:通过微孔时各种微粒均可产生相应脉冲讯号,讯号电平(脉冲幅度)与微粒大小成正比。因此除血细胞外,血中细胞碎片、稀释液中杂质微粒均可产生假讯号,使计数结果倔高。所谓甄别,就是利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平,将低于参考电平的假讯号去掉,以提高细胞计数的准确性。
 
  4.整形:经放大和甄别后的细胞脉冲讯号波形尚不一致,必须经过整形器调整为形状一致标准的平顶波后,才能触发电路。
 
  5.计数:血细胞的脉冲信号经过放大、甄别、整形后,送入计数系统。各型血细胞分析仅计数系统不同,通过各种方式得出计数结果。

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